1. Użyj filtrów online
Filtr w linii jest umieszczany pomiędzy autosamplerem a kolumną chromatograficzną (lub kolumną ochronną). Powszechnie stosowane filtry liniowe dzielą się na filtry liniowe ze stali nierdzewnej z wymienną frytą (0,5 μm lub 0,2 μm) oraz jednorazowy PEEK. W przypadku filtrów on-line wykonanych z różnych materiałów, na ogół należy wybrać płytkę sitową z mniejszym otworem niż płytka ze spieku kolumny, aby skutecznie przechwycić cząstki, które mogą blokować płytkę ze spieku kolumny chromatograficznej. Po stwierdzeniu, że ciśnienie w instrumencie zaczyna wzrastać, możliwe jest, że fryta filtra w linii zaczyna się zapychać i musimy ją zaktualizować, zanim zostanie całkowicie zatkana.
Filtry in-line działają jak membrany, ale nie wymagają dodatkowej pracy. Po odwirowaniu próbki nadal jest możliwe, że niewielka ilość cząstek dostanie się do urządzenia, a pozostałe cząstki mogą zostać przechwycone przez filtr umieszczony w linii przed kolumną chromatograficzną. Ponadto zaletą filtra online jest to, że jest prosty i łatwy do wymiany. Zasadniczo wymiana zajmuje tylko 5 minut i można ją ponownie uruchomić do użytku i nie trzeba tracić czasu na ponowną regulację lub kalibrację. Kolejną zaletą jest to, że wbudowany filtr może również odfiltrować cząsteczki powstałe w wyniku starzenia się niektórych części instrumentu. Zdecydowanie opowiadam się za wyposażeniem każdego przyrządu w fazie ciekłej w wbudowany filtr. Nawet jeśli używana jest kolumna ochronna, zalecam również zainstalowanie filtra liniowego przed kolumną ochronną.
2. Użyj kolumny ochronnej
Kolumna ochronna to krótka kolumna chromatograficzna zainstalowana przed kolumną chromatograficzną. Zwykle ma długość 1-2 cm, a wypełnienie jest dopasowane do wypełnienia użytej kolumny, a wielkość porów użytej fryty nie jest większa niż fryty użytej w kolumnie. Kolumna ochronna spełnia dwie funkcje: (1) może blokować cząstki, które mogą blokować kolumnę; (2) ponieważ kolumna zabezpieczająca i wypełnienie kolumny są dopasowane, wszelkie zanieczyszczenia chemiczne, które mogą nieodwracalnie oddziaływać z wypełnieniem kolumny bez osiągania wartości szczytowych, będą najpierw wychwytywane przez kolumnę zabezpieczającą.
Korzystanie z kolumny ochronnej może zdecydowanie przedłużyć żywotność kolumny. Jednak przed rozważeniem zastosowania kolumny ochronnej zaleca się ocenę następujących punktów:
(1) Osłona nie jest tania, więc zastanów się, czy koszt zakupu osłony można zrekompensować zwiększoną żywotnością kolumny;
(2) Jaka jest żywotność kolumny ochronnej? Należy zwrócić uwagę, kiedy należy wymienić wkład ochronny, aby nie zanieczyścić kolumny chromatograficznej, ponieważ wymiana jest zbyt późna;
(3) Jak przepłukać kolumnę ochronną? Podczas płukania, kolumna ochronna i kolumna chromatograficzna muszą być płukane oddzielnie, aby uniknąć wypłukiwania zanieczyszczeń nagromadzonych w kolumnie ochronnej do kolumny chromatograficznej;
(4) Nie oczekuj zwiększenia wydajności kolumny z powodu dodania kolumny ochronnej 1-2 cm. Chociaż instalowanie kolumny ochronnej jest podobne do zwiększania długości kolumny, użycie kolumny ochronnej dodaje również dwa łączniki i rury łączące, co zmniejszy wydajność kolumny systemu przyrządów, więc byłoby dobrze, gdyby wydajność kolumny bez osłony kolumna mogłaby zostać utrzymana.
Nie trzeba dodawać, że zastosowanie kolumn ochronnych z pewnością może wydłużyć żywotność kolumny, ale zaleca się, aby każde laboratorium oceniło zapotrzebowanie na kolumny ochronne pod względem ekonomicznym i nakładu pracy. Nawet z kolumną ochronną zalecałbym umieszczenie filtra w linii pomiędzy kolumną ochronną a podajnikiem automatycznym, w końcu wymiana filtra w linii jest tańsza niż wymiana kolumny ochronnej i wydłuża żywotność zarówno kolumny ochronnej, jak i kolumny .
3. Nie wprowadzaj nieprzetworzonych próbek
Z obróbką wstępną lub bez, zaleca się, aby wszystkie próbki zostały przefiltrowane lub odwirowane przed wstrzyknięciem. Na przykład, gdy próbka jest filtrowana przez membranę filtracyjną w celu usunięcia cząstek, a tym samym zmniejszenia zatykania fryty kolumny chromatograficznej, wielkość porów membrany filtracyjnej musi być mniejsza niż wielkość porów fryty kolumny chromatograficznej. Na ogół kolumny chromatograficzne z cząstkami większymi niż 3 μm wykorzystują spiek 2 μm, kolumny chromatograficzne z cząstkami 3 μm wykorzystują spiek 00,5 μm, a kolumny z cząstkami mniejszymi niż 3 μm zazwyczaj używają 0,2 μm spieka, więc ogólne filtry 0.45 μm można zasadniczo stosować we wszystkich kolumnach chromatograficznych z wyjątkiem cząstek sub-2 μm; w przypadku kolumn z cząstkami sub-2 μm, na ogół stosuje się filtry z porami 0,2 μm. Większość membran filtracyjnych jest paczkowana i może być bezpośrednio podłączona do strzykawki w celu filtracji lub używana jako płytka filtracyjna w płytce ze studzienkami 96-.